{"id":11215,"date":"2025-08-29T10:14:22","date_gmt":"2025-08-29T09:14:22","guid":{"rendered":"https:\/\/www.afmb.univ-mrs.fr\/?p=11215"},"modified":"2026-03-19T12:46:30","modified_gmt":"2026-03-19T11:46:30","slug":"master-2-internship-offer-on-the-eukaryotic-cell-expression-facility","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/www.afmb.univ-mrs.fr\/en\/2025\/08\/29\/master-2-internship-offer-on-the-eukaryotic-cell-expression-facility\/","title":{"rendered":"Master 2 internship on the “protein production in eucaryotic cells” facility – Filled."},"content":{"rendered":"\n


Production et caract\u00e9risation de prot\u00e9ines recombinantes diff\u00e9rentiellement<\/strong> O-glycosyl\u00e9es pour le ciblage th\u00e9rapeutique<\/strong><\/h2>\n\n\n\n

ann\u00e9e 2025-2026<\/strong><\/p>\n\n\n\n

Dur\u00e9e du stage: 6 mois<\/strong><\/p>\n\n\n\n

Laboratoire d\u2019accueil: <\/strong>Laboratoire Architecture et Fonction des Macromol\u00e9cules Biologiques (AFMB, CNRS\/AMU), Campus Luminy, UMR7257 CNRS, Aix-Marseille Universit\u00e9, Case 932, 163 Avenue de Luminy, 13288 Marseille cedex 9
<\/p>\n\n\n\n

Responsable(s) du stage :<\/strong> Claire Debarnot, Ing\u00e9nieure d\u2019\u00e9tudes, resp. de la plateforme d\u2019expression de prot\u00e9ines recombinantes en syst\u00e8mes cellulaires eucaryotes de PBSIM<\/a> \u2013 claire.debarnot@univ-amu.fr<\/a><\/p>\n\n\n\n

Stage en collaboration avec Fr\u00e9deric Bard, resp. de l\u2019\u00e9quipe GLYcosylation and New THERApies (GLYNTHERA<\/a>), Centre de Recherche en Canc\u00e9rologie de Marseille (CRCM, CNRS\/Inserm\/AMU), Institut Paoli Calmette (IPC), Marseille – frederic.bard@inserm.fr<\/p>\n\n\n\n

Site web de PBSIM :<\/strong> https:\/\/www.afmb.univ-mrs.fr\/facility\/biologie-structurale\/<\/a><\/p>\n\n\n\n

Contexte : <\/strong>Les N- et O- glycosylations des prot\u00e9ines sont des modifications post-traductionnelles critiques qui influencent le repliement, la stabilit\u00e9, le trafic intracellulaire et les interactions prot\u00e9iques. Une glycosylation alt\u00e9r\u00e9e est une caract\u00e9ristique distinctive de nombreux cancers, influen\u00e7ant la croissance tumorale, l’\u00e9chappement immunitaire et la propagation des cellules canc\u00e9reuses2<\/sup>.<\/p>\n\n\n\n

La d\u00e9couverte de l’activation des GALNTs (voie GALA) a montr\u00e9 que la relocalisation des GALNT depuis l\u2019appareil de Golgi vers le r\u00e9ticulum endoplasmique conduit \u00e0 l’augmentation de la O-glycosylation de prot\u00e9ines cl\u00e9s dans les cellules tumorales3<\/sup>. Comprendre et exploiter cette voie offrirait de nouvelles opportunit\u00e9s pour le d\u00e9veloppement de th\u00e9rapies anticanc\u00e9reuses cibl\u00e9es.<\/p>\n\n\n\n

Objectif du stage : <\/strong>Produire, dans des cellules HEK293 de type sauvage et g\u00e9n\u00e9tiquement modifi\u00e9es, des prot\u00e9ines solubles (secr\u00e9t\u00e9es) recombinantes portant des motifs de glycosylation vari\u00e9s. Ces \u2018glycoformes\u2019 serviront d’outils mol\u00e9culaires pour des applications en aval, notamment la g\u00e9n\u00e9ration d\u2019anticorps de type VHHs (\u2018nanobodies\u2019) \u00e0 m\u00eame de cibler sp\u00e9cifiquement ces glycoformes dans un contexte d\u2019immunoth\u00e9rapie anticanc\u00e9reuse.<\/p>\n\n\n\n

S\u00e9quences de travail :<\/p>\n\n\n\n

1. Expression des prot\u00e9ines recombinantes<\/strong> : (a) Expression des prot\u00e9ines cibles, portant une \u00e9tiquette 6xHis, \u00e0 partir de cellules HEK293 de type sauvage ou modifi\u00e9es, adh\u00e9rentes et en suspension, (b) V\u00e9rification de l’expression par SDS-PAGE et western blot avec un anticorps anti-6xHis marqu\u00e9.<\/p>\n\n\n\n

2. Purification et caract\u00e9risation des prot\u00e9ines<\/strong> : (a) Purification des prot\u00e9ines recombinantes par chromatographies IMAC puis d’exclusion de taille avec suivi en SDS-PAGE\/WB, (b) Caract\u00e9risation des profils de glycosylation par \u2018lectin blotting\u2019 et\/ou spectrom\u00e9trie de masse.<\/p>\n\n\n\n

Profil attendu du candidat<\/strong>:<\/p>\n\n\n\n

Comp\u00e9tences en biologie cellulaire et mol\u00e9culaire :<\/strong> Connaissances en culture cellulaire (cellules adh\u00e9rentes et en suspension), incluant les techniques d’asepsie, de comptage cellulaire et de suivi de croissance. Solides connaissances en biochimie des prot\u00e9ines et modifications post-traductionnelles.<\/p>\n\n\n\n

Comp\u00e9tences en purification et analyse prot\u00e9ique :<\/strong> Familiarit\u00e9 avec les techniques de purification de prot\u00e9ines et l’optimisation de protocoles. Notions de spectrom\u00e9trie de masse appliqu\u00e9e aux prot\u00e9ines (id\u00e9alement MALDI-TOF, ESI-MS) et en \u2018lectin blotting\u2019 ou techniques d’analyse des glycanes.<\/p>\n\n\n\n

Qualit\u00e9s scientifiques :<\/strong> Rigueur exp\u00e9rimentale et capacit\u00e9 \u00e0 suivre des protocoles. Esprit d’analyse pour interpr\u00e9ter des r\u00e9sultats. Capacit\u00e9 d’adaptation face aux impr\u00e9vus techniques. Autonomie progressive dans la planification et l’ex\u00e9cution des exp\u00e9riences.<\/p>\n\n\n\n

Qualit\u00e9s personnelles :<\/strong> Patience et pers\u00e9v\u00e9rance (les manipulations peuvent \u00eatre longues en laboratoire L2). Sens de l’organisation pour g\u00e9rer plusieurs exp\u00e9riences en parall\u00e8le.<\/p>\n\n\n\n

Modalit\u00e9s des candidatures<\/strong> : Merci de faire parvenir un CV, une lettre de motivation, une lettre de recommandation et les r\u00e9sultats de la licence 3 et du Master 1 (notes et classement),  par mail \u00e0 Claire.Debarnot@univ-amu.fr<\/p>\n\n\n\n

R\u00e9f\u00e9rences bibliographiques :<\/strong><\/p>\n\n\n\n

NGuyen, A.T., Chia, J., Ros, M., Hui, K.M., Saltel, F. and Bard, F. Organelle specific O-glycosylation drives MMP14 activation, tumor growth and metastasis. Cancer Cell<\/strong> 2017 Nov 13;32(5):639\u2013653.e6Ros M,<\/p>\n\n\n\n

Ros M, Nguyen AT, Chia J, Le Tran S, Le Guezennec X, McDowall R, Vakhrushev S, Clausen H, Humphries MJ, Saltel F, Bard FA. ER-resident oxidoreductases are glycosylated and trafficked to the cell surface to promote matrix degradation by tumour cells. Nat Cell Biol<\/strong> Nov. 2020; <\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"

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