Facility seminar: Denis Ptchelkine, PBSIM – “An update on cryo electron microscopy at the AFMB lab”

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Abstract

Le domaine de la cryo-microscopie électronique a connu une évolution remarquable et continue à se développer très rapidement. Grace aux avancées technologiques récentes, l’efficacité d’utilisation des microscopes à transmission modernes (MET) a beaucoup augmenté. Des systèmes robotiques, des détecteurs très performants et des éléments optiques améliorés ont transformé notre mode de travail en microscopie électronique. Dorénavant, il est possible de tester un grand nombre des conditions (des grilles congelées) en très peu de temps, collecter des données sur des grilles multiples et utiliser des logiciels avec des capacités IA intégrées.

Le labo AFMB s’est équipé récemment du nouveau MET Glacios 200kV permettant le criblage rapide des échantillons en conditions cryo et la collection des données à haute résolution. Le microscope sera disponible aux utilisateurs à partir du mois d’avril 2024. La configuration moderne de notre Glacios assure la plus haute performance possible pour un instrument de 200kV. La combinaison du détecteur d’électrons direct de dernière génération Falcon4i avec le filtre d’énergie Selectris X disponibles sur notre MET résulte en une qualité supérieure des images et une rapidité d’acquisition imbattable (>6K images/ 12h de collecte en mode counting).

Des tests de performance de notre appareil conduits à l’usine Thermofisher pendent la procédure d’acceptation CWAT ont démontré que la résolution supérieure à 1.9A peut être atteinte sur un échantillon d’apoferritine. La plupart des expériences sur MET Glacios seront effectuées sur des échantillons des particules isolées. Cependant ce microscope peut être utilisé pour des collections des données préliminaires en cryo-tomographie électronique sous conditions de l’épaisseur d’échantillons suffisamment fine (<150nm) tels que lamella ou bien des particules purifiées (échantillons des vésicules inclus).