Sélection et production de VHHs/nanobodies de camélidés
Ce service de PBSIM offre une gamme de compétences allant de la selection de VHHs/nanobodies de camélidés jusqu’à leur production et caractérisation (SPR, BLI, micro-cal).
L’utilisation de domaines d’immunoglobulines mono-chaines de camélidés, appelés VHHs ou “nanobodies”, a connu une forte croissance au cours des dernières années. L’utilité des nanobodies en biologie structurale est maintenant fermement établie, car ils permettent d’accéder à de nouveaux épitopes dans des régions concaves et à la charnière entre domaines, et de stabiliser les protéines cibles.
Des résultats remarquables ont été obtenus en utilisant les nanobodies avec des protéines multi-domaines flexibles, avec de grands complexes et surtout avec des protéines membranaires telles que des GPCRs, récepteurs divers et canaux. Le groupe de biologie structurale du laboratoire AFMB a été parmi les pionniers à travailler dans le domaine des VHHs/nanobodies.
La plateforme offre un service qui comprend l’immunisation de lamas (Lama glama glama) ou chameaux (Camelus dromedarius) en vue d’obtenir des bibliothèques de cibles spécifiques, le criblage par phage display permet d’obtenir des clones de chaque cible, à partir desquelles plusieurs vHHs/nanobodies sont clonés (service 1), exprimés (service 2) et caractérisés (service 3). Les affinités sont comprises généralement entre 1 et 50 nM (Kd). Notre bibliothèque « naïve » qui regroupe les lymphocytes d’animaux non vaccinés – dans notre cas, 3 chameaux et 4 lamas – peut aussi être utilisée. La randomisation d’un des trois CDRs suivie de criblage conduit à des affinités sub-nanomolaires.
Accessibilité
Académiques et industriels
Coût
A définir pour les industriels en fonction du temps d’utilisation et de l’assistance nécessaires.
Comment faire une demande ?
- Contact : Anaïs Gaubert
Equipement spécifique
- FPLC Äkta Purifier and Xpress (GE Heathcare / Cytiva)
- Microcalorimetry : MicroCal iTC200 (GE Heathcare)
- Microscale thermophoresis : MST Monolith NT.115 (NanoTemper Technologies GmbH)
- Bio-layer interferometry : Octet RED96 system and Blitz system (Pall ForteBio LLC)
- Size exclusion chromatography / multi-angle light scattering / refractometry : HPLC Alliance (Waters) / Minidawn Treos (Wyatt) / Optilab rEX (Wyatt)
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Publications
- Eric Durand, Van Son Nguyen, Abdelrahim Zoued, Laureen Logger, Gérard Péhau-Arnaudet, Marie-Stéphanie Aschtgen, Silvia Spinelli, Aline Desmyter, Benjamin Bardiaux, Annick Dujeancourt, Alain Roussel, Christian Cambillau, Eric Cascales and Rémi Fronzes. Biogenesis and structure of the bacterial Type VI secretion membrane core complex. Nature, 300 :555-560 [doi: 10.1038/nature14667] (2015).
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- Nguyen, V.S., Spinelli, S., Desmyter, A., Le, T.T.H., Kellenberger, C., Cascales, E., Cambillau, C. and Roussel, A., Production, crystallization and X-ray diffraction analysis of a complex between a fragment of the TssM T6SS protein and a Camelid nanobody, Acta Crystallogr. F, F71, 266-271 (2015)
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- Janice, M.J. Pérez, Jean-Guillaume Renisio, Jeanine J. Prompers, Chris J. van Platerink, Christian Cambillau, Hervé Darbon, and Leon G.J. Frenken, Intrinsic Stability of a Llama Antibody domain as Determined by Circular Dichroism, Nuclear Magnetic Resonance and Electrospray Ionisation Mass spectrometry, Biochemistry 40, 74-83 (2001).
- Serge Muyldermans, Christian Cambillau and Lode Wyns, Recognition of antigens by single domain antibody fragments: the superfluous luxury of paired domains. TIBS 26, 230-235 (2001).
- Silvia Spinelli, Mariella Tegoni , Leon Frenken, Cees van Vliet and Christian Cambillau, Lateral Recognition of a Dye Hapten by a Llama VHH Domain , J.Mol.Biol. 311:123-9 (2001).
- Silvia Spinelli, G.J. Leon Frenken , Pim Hermans, Theo Verrips, Kieron Brown, Mariella Tegoni and Christian Cambillau. Camelids heavy chain variable domains provide efficient combining sites to haptens. Biochemistry, 39, 1217-1222 (2000).
- Silvia Spinelli , Leon Frenken, Dominique Bourgeois, Lian de Ron, Will Bos, Theo Verrips, Christelle Anguille, Christian Cambillau and Mariella Tegoni The Crystal Structure of a Llama Heavy Chain Variable Domain. Nature Struct. Biol., 3, 752-756 (1996).
